脾脏流式细胞术

尼龙膜分离脾脏,5mlPBS重悬脾脏单个细胞+5ml淋巴细胞分离液,玻璃管中2000rpm 水平离心20min。(其间只要接触到脾脏细胞的大枪头都不要换,可准备一个一次性手套,再利用的枪头可以打在里面)。

吸取中间细胞层于新玻璃管中,PBS洗2遍,1500rpm,5min。

用500ul 8%1640重悬细胞,进行细胞计数,调整细胞数为相同浓度(5*106个/ml,即5*105 个/孔。不得少于2-3*105 个/孔)铺96孔板。每只老鼠的脾脏做3个孔重复,若做MTT,可加阴性对照,同样三个孔重复。加入猪瘟病毒抗原(细胞毒或血毒都可)刺激,2ul血毒/孔,培养72h后吸取上清检测IL-4 和 IFN-γ含量。下层细胞可做MTT。

剩余的细胞,水平离心,弃去营养液,用PBS重悬后,加入三色抗体,孵育30Min后,离心洗1-2次(看细胞数决定),底部细胞用1%胎牛血清的PBS重悬可以保存一夜。

你可能喜欢

  • 脾阴
  • 细胞液
  • 细胞结构及功能
  • 脾切除术
  • 流式细胞技术
  • 脾动脉栓塞术
  • 脾栓塞术
  • 流式细胞检测细胞周期

脾脏流式细胞术相关文档

最新文档

返回顶部