骨髓间充质干细胞移植修复大鼠坐骨神经挤压伤的实验研究

目的 研究体外培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)体内移植后,促进大鼠周围神经损伤修复的可行性,并探讨其可能的机制。方法 采用贴壁法分离培养BMSCs,建立大鼠坐骨神经挤压伤模型,将BrdU标记的BMSCs移植到神经损伤处,术后示踪细胞存活情况,同时设立对照,通坐骨神经功能指

骨髓间充质干细胞移植修复大鼠坐骨神经挤压伤的

实验研究

杨光1,尹维田1,薛金伟2,李春雨1,范东燕3

1吉林大学中日联谊医院手外科,长春 (130033)

2河北大学附属医院骨科,石家庄 (071000)

3吉林大学公共卫生学院,长春(130021)

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摘 要:目的 研究体外培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)体内移植后,促进大鼠周围神经损伤修复的可行性,并探讨其可能的机制。方法 采用贴壁法分离培养BMSCs,建立大鼠坐骨神经挤压伤模型,将BrdU标记的BMSCs移植到神经损伤处,术后示踪细胞存活情况,同时设立对照,通坐骨神经功能指数、组织学、电生理等方法比较移植组和对照组神经再生优劣,并应用免疫组化和图像分析技术对1、2、4、6周损伤神经远端NGF蛋白表达情况进行分析。结果 直到术后4周在细胞移植组神经损伤处可以检测到BrdU阳性细胞;移植组的神经再生优于对照组;术后1、2周两组NGF蛋白表达差别显著,移植组高于对照组,而4、6周,两组差别不明显。结论 体外培养的BMSCs可进行体内移植,移植后能在局部损伤微环境中发挥作用,促进周围神经损伤修复,提高早期NGF表达是其机制之一。 关键词:骨髓间充质干细胞,细胞移植,周围神经

1.引言

促进神经再生,提高神经损伤的治疗效果,一直是周围神经外科学领域中研究的重点。最近细胞移植方法渐为人们所关注,已有研究表明雪旺细胞移植有促进周围神经再生的作用[1],但雪旺细胞移植面临取材困难、免疫排斥反应等诸多缺点。而骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养方便,细胞免疫原性低,更适合于细胞移植,具有更大的应用潜力。本实验通过建立坐骨神经损伤模型,以明确BMSCs体内移植修复大鼠周围神经损伤的可行性,以及对NGF表达的影响,希望为阐明BMSCs促周围神经再生的机制和进一步构建组织工程周围神经起到有益的探索作用。

2.材料和方法

2.1 材料

选取健康清洁级雌性Wistar 大鼠50只,鼠龄2个月,体质量200~250g。随机数字表法分为细胞移植组25只、对照组25只。另选取出生1周的雌性Wistar大鼠6只用于制备BMSCs。大鼠由吉林大学基础医学院动物实验中心提供(中心许可证号SCXK-J2003-2001),BrdU(Sigma 公司);小鼠抗BrdU单克隆抗体(Santa Cruz公司);兔抗NGF单克隆抗体(Santa Cruz公司)。

2.2 方法

BMSCs的培养和BrdU标记:将新生大鼠颈椎脱臼处死后,无菌条件下取出双侧股骨,培养液反复冲洗,将所收集的细胞悬液制备成单细胞悬液。细胞计数后以1.0×106/ml接种到含20%胎牛血清的低糖DMEM细胞培养液的培养瓶内,置于37℃、5%CO2培养箱中静置

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