纤维素酶产生菌的筛选鉴定和产酶条件优化

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纤维素酶产生菌的筛选鉴定和产酶条件优化 汤斌,阿娜,张庆庆陈 (徽工程科技学院生物与化学工程系,徽芜湖,4 0 0安安 210)

摘要筛选得到 1纤维素酶产生菌 T 1根据真菌的分类鉴定方法,定为根霉属菌 ( hz p ss .。正株 C,鉴 R i o u p )

交实验确定该菌株的优化培养条件为:草采用 1的醋酸预处理,草与麸皮比为 3:,稻 5稻 7固液比为 1:,种 3接量 1, O温度 2 ̄稀释 1的 Mad l营养液作为培养基液体。在优化培养条件下培养 9 h发酵终点时滤纸 8 C,倍 n es 6, 酶活 F A、 MC酶活分别达到 2 .、 4 . g干物质 )较优化前的 1 .、 8 . g干物质 )别提高了 P C 5 5 2 9 0 U/ (, 7 8 1 7 0 U/ (分 4 和 3。 3 3

关键词筛选,定,霉,维素酶,化鉴根纤优

运用微生物对纤维类物质进行充分的酶解作用, 可将纤维素材料转化成糖、乙醇、饲料蛋白等,对缓解

1 2 1初 筛 . .

对采集到的样品进行稀释、平板,长有单菌涂从落的平板中选取典型的真菌菌落转接斜面,同时制并片作纯度检查,不纯,若应进一步划线分离,至获得直

全球能源危机、品和饲料资源紧张以及环境污染有食 着重大意义_。产纤维素酶的生物种群相当广泛, 1]如真菌、菌、线菌等,内外研究主要集中在木霉细放国属、曲霉属和青霉属上口。目前纤维素酶的生产存 ]在着酶活力低,生产周期长等问题,不能真正用于还大规模工业生产,因而筛选高活力酶、酵周期短的发菌株是降解纤维类物质的关键。国内外对根霉属产

纯培养体为止;纯培养体点种至初筛培养基上,将 2℃培养 4 8 8h后用 1rg /mL的刚果红染液染色 2 a

h倾去染液后再用 1mo/, lL的 Na OH溶液洗涤过多染液,制酶活性,抑固定水解圈大小。菌体若能分泌 纤维素酶,在菌落周围会出现清晰的水解圈,则依据水解圈与菌落直径比值 (

HC比值 )的大小选择高活力菌株。选取 HC比值大的菌落移接到试管斜面上培养保存备用。 1 2 2复筛 . .

纤维素酶的研究报道较少,其培养条件的优化尚未对 见报道。本研究采用正交设计实验优化了根霉 R io u s. 1的培养条件, hz p sp TC目的在理论上可以丰

富纤维素酶的研究资料,实践中指导生产及应用。在

将斜面培养物用生理盐水洗下,分混匀,当充适

1材料与方法 1 1实验材料 . 1 1 1实验菌株 . .

稀释,备成孢子悬液;孢子悬液接种于内含 5制将 0 mL种子培养基的 2 0mL的三角瓶中,整孢子浓 5调

度为 1个/ 0 mL,于转速为 1 0r mi 5/ n的摇床上培养 1; 2 0mL三角瓶内添加厚约 1 5c的固态发 2h于 5 . m酵培养基,接人种子培养物,置培养 8d 2d翻曲 1静, 次,湿度控制在 7。通过对发酵产物酶解还原糖 O产量的测定,选出酶活性高的菌株进入下一轮发酵筛产酶条件的研究。鉴定后接种保藏。 12 3酶活测定[ ..

分离自黄山生态林中,由安徽工程科技学院可再生资源研究室选育并保存。 1 1 2培养基 ..

初筛培养基[ C: MC N 0g葡萄糖 5g琼脂— a1;; 2; a d l无机营养盐 (除有机物 ) 0 0g M n es扣 10 0 mL;

自然 p H。复筛及固态发酵培养基 (化前 )麸皮 5优:

g稻草 5g混合物加入 3、 0 mL的 Ma d l营养盐。 n es 菌种保藏培养基:萄糖一铃薯琼脂培养基。种子葡马培养基:0麸皮浸出汁。] 1 1 2实验方法 . 第一作者:士,学教授。 *安徽省高校自然科学基金重点资助项目( J 0 7 1 ) K 2 0 A0 8 收稿日期:0 7 1 4 2 0一O—0,改回日期:∞ 7 0— 2 2— 3 2

1 3实验设计 .

在对根霉 R io u p TC h zp ss . I发酵特性初步了解

的基础上,用 L 3 )采 (正交表优化培养条件,具体因 素和水平安排如表 1。用统计分析软件 S . AS 8 2对

实验数据进行方差分析。

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纤维素酶产生菌的筛选鉴定和产酶条件优化

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