2000酿酒酵母细胞四种转化方法的比较

酵母转化

第29卷第4期             上海师范大学学报(自然科学版)

2000年12月          J.ofShanghaiTeachersUniv.(NaturalSciences).29,No.4VolDec.2000

酿酒酵母细胞四种转化方法的比较

宋 磊,娄玉霞,李新国

(上海师范大学生物与化学工程学院,上海奉贤201418)1978年,Hinnen等和Begges首先报道了酵母原生质体转化方法[1,2]Λ化效率较高,但此方法容易形成多倍体细胞,且细胞再生困难Λ进[3],虽提高了转化效率,减少了多倍体细胞的形成,)ΛIto等,响进行研究[4]Λ进入90年代后,人们在LiAc的浓度等方面进行了改进[5~7]Λ,Λ1pYES22hIL26(实验室构建),其宿主菌为酿酒酵母(S.cerevisiae)DBYATahis3,leu223,leu22113,trp12289,ura3252Λ由日本九州大学遗传学资源细胞制御研究室Shirahada教授惠赠Λ选用的方法分别为Ito方法[4],KaTaKuRa方法[5],Ito改进方法[6],高速转化方法[7]ΛIto方法的细胞生长期为对数中期,洗涤用TE,LiAc预处理需要约1h,LiAc浓度为0.2mol L,PEG4000浓度为70%,VectorDNA加入量是10Λg,不加CarrierDNA,热冲击时间为5minΛKaTaKuRa方法的细胞生长期为对数前期,洗涤用H2O,LiAc预处理需要约1h,LiAc浓度为0.2mol L,PEG4000浓度为60%,VectorDNA加入量是10Λg,不加CarrierDNA,热冲击时间为5minΛIto改进方法的细胞生长期为对数前期,洗涤用TE LiAc,不需要LiAc预处理,LiAc浓度为0.1mol L,PEG4000浓度为40%,VectorDNA加入量是1Λg,CarrierDNA是鲑鱼精DNA(50Λg),热冲击时间为15minΛ高速转化方法的细胞生长期为对数前期,洗涤用TE LiAc,不需要LiAc预处理,LiAc浓度为0.1mol ~1Λg,CarrierDNA是小牛胸L,PEG4000浓度为40%,VectorDNA加入量是0.1

腺DNA(15Λg),热冲击时间为25minΛ

按照前述的四种转化方法对质粒pYES22hIL26转入酵母细胞DBY747分别进行了实验,并对每种转化方法所得的活细胞数与转化子数进行了测定,从而计算出各自的转化效率

[6]

2000酿酒酵母细胞四种转化方法的比较

(见表1)Λ由表1可以看出,无论是转化子 ΛgDNA还是转化效率,Ito改进方法与高速转

收稿日期:2000206209

作者简介:宋磊(19722),女,上海师范大学生物与化学工程学院讲师Λ

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