产物类似物对南美白对虾N_乙酰_D_氨基葡萄糖苷酶活力的影响

医药论文

第 43 卷 增 刊 2004 年 8 月

(自然科学版) 厦门大学学报

Jo ur nal of Xiamen U niversit y ( Nat ural Science)

Vol . 43 Sup .

Aug. 2004

文章编号 :043820479 (2004) S2024204

β2D2氨基 产物类似物对南美白对虾 N2乙酰2

葡 萄 糖 苷 酶 活 力 的 影 响

3

谢晓兰 ,王勤 ,陈清西

(厦门大学生命科学学院 细胞生物学和肿瘤细胞工程教育部重点实验室 ,福建 厦门 361005)

β2D2氨基葡萄糖苷酶 摘要 : 以南美白对虾为材料 ,分离提纯 N2乙酰2,研究产物 NA G 及产物类似物 glu 、gal 、f ru 等对 β2D2GlcNAc 活力的影响. 抑制强度次序为 该酶催化水解 p Np2: NA G > gla > glu > suc > f ru. ,结果

表明 : NA G 对酶的抑制作用表现为反竞争型 ,其抑制常数 KIS为 11 . 4 mmol/ L / ; gal 、glu 、f ru 型抑制 ,抑制常数 KI 分别为 0 . 709 、0 . 747 和 2 . 94 mol/ L ; suc , KI = KIS =

2 . 58 mol/ L .

D关键词 : ; ;中图分类号 : 文献标识码 :A

β2D2氨基葡萄糖苷酶 ( NA Gase , EC3 . 2 . N2乙酰2

1 . 52) 能协同内切几丁质酶 、外切几丁质酶将多聚壳

β2D2氨基葡萄糖. 对虾 NA Gase 聚糖分解成 N2乙酰2

不仅与对虾生长发育过程中的周期性蜕皮及虾幼体 的孵化密切相关1 , 还与食物消化吸收 、抗菌防卫 等有关. 目前 ,国内外仅有关于美国龙虾 、南极磷虾

2 ~4

的 NA Gase 的研究报导,且研究工作还局限于 酶的分离纯化 、基本性质及组织分布差别方面. 南美

( Pen aeus v a n n a m ei ) 是目前世界上 白对虾 3 大养殖

对虾中单产量最高的虾种. 我国沿海养殖面积逐年 增加 ,但在对虾养殖过程中经常因食物调配不当 、养 殖环境污染而扰乱了对虾的正常生理活动与物质代 谢 ,使对虾的健康程度下降 ,造成巨大的经济损失 , 因此 ,研究南美白对虾对其养殖具有重要的科学理 论指导意义. 我们曾经探讨了 NA Gase 的分离纯化 、 基本性质 、各种金属离子及有机溶剂对酶活力及构

象的影响 ,为养殖环境污染监测提供指导. 本文报道 产物及产物类似物对 NA Gase 的活力影响 ,该研究 对 NA Gase 催化机理的了解 、南美白对虾不同生长 期的食物调配具有重要的指导作用.

1 材料与方法

1 . 1 材 料

β2D2氨基葡萄糖苷酶 ( NA Gase) 从南美 N2乙酰2

白对虾内脏分离纯化得到 , 酶制剂为 PA GE 单一

β2D2氨 纯 ,比活力为 1 560 U / mg ;对硝基苯2N2乙酰2

( p Np2β2D2GlcNAc) 购置于上海医药工 基葡萄糖苷

业研究院生化室 ;其余试剂均为国产分析纯 ;使用的

蒸馏水为玻璃重蒸水.

1 . 2 方 法

β2D2 酶活力的测定方法参考文献 5 , 以 p N P2GlcNAc 为底物 ,在 2 mL 的测活体系中 ,包含 0 . 15

( p H 5 . 2) 和 0 . 5 mmol/ L mol/ L NaAc2HAc 缓冲液

收稿日期 :2004205209

( 2004J 054) 资

( 1974 - ) ,女 作者简介 :谢晓兰 ,在职博士研究生. 现在

泉州师范学院化学系任教. 3 Correspo nding aut hor ,

E2mail :chenqx @jingxian. xmu. edu. cn

的底物 ,于 37 ℃恒温水浴中加入适量酶液 , 准确反 应 10 min ,加入 2 mL 0 . 5 mol/ L NaO H 终止反应 , 在 752 型 Spect rum 紫外可见分光光度计上测定波

( O D405 nm ) , 消光系数按 长为 405 nm 的光密度值

4 6

1 . 73 ×10L / ( mol·cm) 计算. 产物类似物对酶的 抑制机理判断是通过 Lineweaver2Bur k 双倒数作图 , 比较酶催化反应的动力学参数 ,包括表观米氏常数

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