纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件的选择

从土壤中分离22株菌株,采用透明圈法筛选和摇床液体发酵试验,对筛选菌株进行了滤纸酶活性、脱脂棉酶活性、CMC酶活性、β-葡萄糖苷酶活性测定,筛选出1株产纤维素酶活性较高的菌株(522A),并通过正交试验,确定该菌株的最优产酶条件。

纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件的选择

石毅

商丘师范学院生物系, 河南商丘 (476000)

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摘 要:从土壤中分离22株菌株,采用透明圈法筛选和摇床液体发酵试验,对筛选菌株进行了滤纸酶活性、脱脂棉酶活性、CMC酶活性、β-葡萄糖苷酶活性测定,筛选出1株产纤维素酶活性较高的菌株(522A),并通过正交试验,确定该菌株的最优产酶条件。

关键词:纤维素酶;酶活性;正交试验

纤维素物质是地球上最丰富的可再生资源,植物材料的主要组分除了半纤维素和木素以外,就是纤维素。纤维素物质占地球总生物量的40%,它由β-1,4键连接的葡萄糖单位长链组成,这些长链在形成更复杂的纤维素结构。但纤维素酶的研究是从1906年Seilliere在蜗牛的消化液中发现了分解纤维素的纤维素酶后,才逐步受到世界重视的。1912年,Pringsheim开始进行纤维素微生物的酶学研究[1]。近入20世纪70年代,西方发达国家已工业化生产纤维素酶制剂,我国也已在酒精、白酒等行业进行实质性的应用[2]。

由于纤维素广泛分布,自然界的细菌、放线菌和真菌中都具有分解纤维素能力的类群[3]。本文通过从土壤中分离22株菌株,采用透明圈法筛选和摇床液体发酵试验,对筛选菌株进行了滤纸酶活性、脱脂棉酶活性、CMC酶活性、β-葡萄糖苷酶活性测定,筛选出1株产纤维素酶活性较高的菌株(522A),并通过正交试验,确定该菌株的最优产酶条件。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1菌种

取土样五种,分别在商丘师范学院家属院内树林下(1号),家属院后麦地东(2号),家属院后麦地西(3号),家属院西树林下(4号),操场东树林下(5号),并从中分离22株菌株:112A、221A、223A、231A、322A、323A、421A、422A、423A、433A、521A、521B、522A、522B、523A、523B、531A、531B、532A、532B、533A、533B。

1.1.2分离菌种和斜面菌种培养基

马铃薯糖琼脂培养基(PDA):马铃薯(去皮)200g,蔗糖 20g,琼脂 20g,蒸馏水 1000ml,自然pH值[4]。

1.1.3鉴定菌种培养基

察氏纤维素培养基:蔗糖 30g,硝酸钠 2g,磷酸氢二钾 1g,七水合硫酸镁 0.5g,氯化钾 0.5g,七水合硫酸亚铁0.01g,琼脂 20g,纤维素 5g,琼脂 20g,蒸馏水 1000 ml,pH 7.0-7.2[4]。 石毅(1982-),男,河南郑州人,在读本科生,E-mail:shiyi0@http://www.wendangwang.com。

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