细胞的离心分离基础和分离实例

细胞的离心分离基础和分离实例

细胞的离心分离基础和分离实例

(主要内容源自文献1)

YU.2005

利用细胞的特性[尺寸、密度、电特性、表面(抗原)性质,光散射特性等等]可以用各种方法分离和纯化细胞。离心分离是利用不同尺寸和密度的细胞在离心场中沉降行为的不同,从组织匀浆或血液中分离纯化的技术。用离心技术分离和纯化细胞主要依赖的方法是差分离心、速率-区带密度梯度离心、等密度离心和利用特殊转头的细胞浮选离心。

下面的表格概括了细胞离心分离纯化主要方法:(文献1)

分离依据 细胞密度

(ρ)

方法名称 平衡等密度离心 差分离心 单重加度降

位力速沉

离心加速度

梯度形状

使用工具

局限性

优点

细胞易聚合;应较面较广

比较高 连续或不连续(100~梯度 30,000×g) 1~300×g 1g

无梯度 连续梯度

甩平转头,固定离心力较角转头,区带转大,等密度头 纯样品区带

可能重叠 角式为主 特殊分离容器

低分辨率

沉降速度 (细胞平均直径d密度ρ)

快速,简易

容量50×简单,价廉 106个细胞,特殊装备,时间长

大容量用区带转头,小容量用甩平转头,后者操作简单

快速,高分辨率,处理量较大

速率-区带离心 离心浮选

20~1,000×g

连续梯度,线性或等速度沉降梯度,ρ梯度介质≤ρ细胞

甩平转头或区带中等分辨转头 率,容量范

围宽 细胞浮选转头(日立或Beckman)

装置费用高

100~无梯度 3,000×g

细胞离心分离纯化概述:

1. 利用细胞密度差异进行分离:

一般的做法是在连续或者不连续(阶梯)梯度液上表面铺样品,梯度的范围应该包含被分离的细胞的密度,经过离心达到平衡后各种细胞沉降在它们各自的等密度区形成比较纯的单一细胞分布区带。这种等密度离心法可以用于制备或分析用途。用于制备时要注意在匀浆中可能有多种不同密度的细胞,如果它们的密度差很小,离心后会造成各个细胞区带之间的重叠。因此要优先考虑利用细长离心管,合适的密度范围;较少的加样量(离心管容量的2%~3%);或者用同一个甩平转头进行2~3次分离;每一次分离的最大、最小密度梯度差减少(即减少梯度斜率;分别用凸指数及凹指数梯度曲线进行分离;用不同的等渗液改变不同细胞在梯度介质中的浮密度(文献2)。

在离心管中细胞匀浆可以铺在预形成的连续或不连续梯度液的上部或铺在梯度液

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