果皮中酵母菌的分离与纯化 - 副本

果皮中酵母菌的分离与纯化

一、实验目的

应用酵母菌的生理生化和生态学的特点,从自然环境中分离酵母菌,并掌握微生物分离纯化的基本方法。

二、实验原理

酵母菌常见于含糖比较高的环境中,如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件,最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速,容易分离培养。在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长快,利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养,然后在固体培养基上划线分离纯化。

三、器材和用品

1、苹果皮、葡萄皮等。

2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基:马铃薯200g(煮开10min后过滤取汁),葡萄糖20g,琼脂20g,水1000ml,pH自然。

3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液:配方同上,不加琼脂加乳酸,按1000ml培养基加入5ml乳酸,pH为5.5左右。

4、无菌吸管、无菌培养皿、涂布棒、美兰染液、显微镜、接种环等。

四、实验方法

1、接种:取果皮(不需冲洗)5克,加入到100ml无菌水中,充分搅拌后,用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,在28-30℃培养箱中培养24h-48h,可见培养液变浑浊。

2、加富培养:用无菌吸管取上述培养液1ml,注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,在28-30℃培养箱中培养24h-48h。

3、分离纯化: 用1ml的无菌吸管单独吸取上述培养液至9ml的无菌水中便是10-1如此稀释10-2、10-3。马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板,用1ml的无菌吸管吸取10-3培养液至培养基表面,用无菌的玻璃刮产迅速涂抹均匀,而后做好标记放置恒温箱培养大约24-48小时(培养皿倒置),菌落长出后,观察菌落,并镜检菌体,一般一个单独的菌落可视为一个细胞发育而来,是纯培养,如果结果复杂,未得纯培养,可进行再次分离培养(划线法),直到纯化为止(注意保藏菌种),对纯化菌种再次固

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