马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA_D2_D3区序列分析

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植物病理学报

ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(3):254 261(2009)

马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA D2/D3区序列分析

于海英,彭德良,胡先奇,黄文坤

2

1,2121

(1中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室,昆明650201)

摘要:我国危害甘薯的马铃薯腐烂茎线虫rDNA ITS基因片段长度存在A型(900bp)和B型(1100bp)2个类型,A型腐烂茎线虫群体的ITS片段比B型群体少200bp。为了进一步研究这2种类型群体的发育关系,本文用线虫通用引物D2A和D3B对来自国内的21个马铃薯腐烂茎线虫群体和1个韩国的马铃薯腐烂茎线虫28SrDNA D2/D3区进行了PCR扩增,均产生大小一致的片段,长度约为780bp,克隆、测序后用DNAMAN5.2软件和MEGA4软件进行分析比对,结果表明我国21个马铃薯腐烂茎线虫群体28SrDNA D2/D3区只有20余个碱基的差异,相似率达97.2%。基于UPGMA构建的系统发育树很好地区分了马铃薯腐烂茎线虫A型和B型群体,展现出了群体的来源及发育关系。关键词:马铃薯腐烂茎线虫;D2/D3区片段;序列分析

Molecularcloningandsequencesanalysisof28SrDNA D2/D3regionsofDitylen chusdestructoronsweetpotatoinChina YUHai ying1,2,PENGDe liang1,HUXian qi2,

HUANGWen kun (1TheStateKeyLaboratoryforBiologyofDiseaseandInsectPests,InstituteofPlantProtection,Chi

neseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China;

2

1

KeyLaboratoryofAgriculturalBiodiversityandPestsContro,l

MinistryofEducation,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China)

Abstract:TwotypesofrDNA ITS(TypeA,900bpandTypeB,1100bp)weredemonstratedtoexistinDitylenchusdestructorpopulationsonsweetpotatoinChina.TheD2/D3regionsof28SrDNAfrom22popu lationsofD.destructorwereamplifiedwithuniversalprimerpairsD2AandD3B.All22populationsyieldedonesinglefragmentabout780bp.SequenceanalysisandalignmentwereconductedbyusingthesoftwareMEGA4andDNAMAN5.2andall22sequencesweresubmittedattheGenBank.Theresultsshowedthatse quencedifferencesofD2/D3regionwereonlyinafewsites,andthatthesimilaritywas97.2%.TwotypescouldbedistinguishedinthephylogenetictreebyusingUPGMAmethod.Theevolutionaryrelationshipbe tweentwotypesandtheoriginofDitylenchusspecieswerediscussed.Keywords:Ditylenchusdestructor;D2/D3expansionsegments;sequencesanalysis

中图分类号:

S435.31 文献标识码:A 文章编号:

0412 0914(2009)03 0254 08

马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchusdestructor)是我国重要的进境植物检疫性有害生物,在我国主要分布于河北、山东、北京等地,主要危害甘薯,是甘薯生产上重要的病害之一。线虫形态特征的重叠交错和形态的多样性使得传统的形态学鉴定

[1]

变得困难,随着分子生物学技术的飞速发展,分子诊断成为植物线虫研究的新途径。

物种的多样性最本质的体现在核酸的结构差异上,对核酸的分析可使我们了解物种进化历史的精确信息。在真核生物中核糖体RNA包括大小

[2]

收稿日期:2008 03 21;修回日期:2009 04 15

基金项目: 973 项目(2009CB119200);国家自然科学基金资助项目(30871627);国家 十一五 科技支撑计划(2006BAD08A14)通讯作者:彭德良,研究员,主要从事植物线虫分子生物学研究;E mai:ldlpeng@http://www.wendangwang.com

第一作者:于海英(1981-),女,吉林白城人,云南农业大学2005级硕士研究生,主要从事植物线虫学研究;E mai:lyuhaiying1981@

http://www.wendangwang.com。

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