银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究

                                 黑龙江医药科学 2006年10月第29卷第5期 34

银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究

钟尉方1,王岳鸿2,于 莲3

(1.佳木斯大学2004届研究生,黑龙江佳木斯154007;2.佳木斯大学化学与药学院2005届研究生,黑龙江佳木斯154007;3佳木斯大学化学与药学院,黑龙江佳木斯154007)

摘要:目的:考察复方银杏注射液中银杏黄酮苷含量测定的水解条件。方法:采用正交设计法,考察水解时间(A)、水解温度(B)、盐酸浓度(C)3个因素对高效液相色谱法含量测定的影响。结果:优化后的水解条件为:水解1.5h,80℃恒温水浴,10mol L-1盐酸。结论:该水解条件稳定,为准确测定复方银杏注射液中银杏黄酮醇苷提供保证。

关键词:复方银杏注射液;正交实验;高效液相色谱法;水解条件

中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1008-0104(2006)05-0034-02  复方银杏注射液是根据中医临床经验而开发的复方注温水浴锅,天津市泰斯特仪器有限公司。射剂,具有增加血管流量,改善血液循环,抑制血小板聚集,1.2 药品及试剂防止血栓形成等作用。银杏黄酮是其有效成分,目前,国内外,批号对银杏黄酮定量的方法多为反相高效液相色谱法[1,2],即先)、(对供试品进行水解,使其黄酮苷键断裂,));磷酸(分析皮素(Quercetin)、山奈素(l鼠素纯);甲醇(色谱纯,天津市科密欧化学(Lsorhamnetin)的含量,2.],

);娃哈哈饮用纯净水(杭州娃哈哈集团有限公

司)。,2 方法及结果

现,1的同批次的供试品含量差异大,

2.1 色谱条件与系统适用性

所以有必要对供试品的水解条件进行优化和严格控制,为其

色谱柱ZorbaxSB-C18柱(5Λm,4.6mm×150mm),流动质量标准的制定提供依据。

相为甲醇-0.4%磷酸溶液(45:55),检测波长为360nm,流速1 仪器及材料

1.0ml min-1,柱温30℃,进样量10Λl。理论板数按槲皮素峰1.1 仪器

计算不低于2500,异鼠李素分离度大于1.5,各峰的确认和分

自动进样器、Agilent1100高效液相色谱系统(四元泵、离见图1

银杏黄酮醇苷水解条件的正交实验研究

柱温箱、可变波长扫描紫外检测器)。KD-98- 型电热恒

图1 对照品及供试品色谱图

1)槲皮素峰对照品2)山柰素对照品溶液3)异鼠李素对照品溶液4)复方银杏注射液供试品溶液

2.2 标准曲线的绘制2.4 精密度实验

精密称取五氧化二磷干燥过夜的槲皮素3mg、山柰素3mg、异鼠李素1mg,甲醇溶解定容后,稀释成为6个梯度浓度,0.45Λm微孔滤膜过滤,作为对照品溶液,于上述色谱条件下进样10Λl,记录峰面积积分值,分别以对照品的浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,结果见表1。

表1 标准曲线

苷元标准曲线槲皮素Y=57.3750X-14.7570山柰素Y=50.1940X+15.3110异鼠李素Y=54.8570X-1.2309

线性范围(-1)r

r=0.99972.07~69.00r=0.99961.91~63.60r=0.99940.73~24.20

取槲皮素、山奈素、异鼠李素浓度分别为10.35Λg

-1

9.54Λg ml、3.63Λg ml-1的对照品混合液,在上述ml、

色谱条件下连续进样6次。槲皮素、山柰素、异鼠李素的峰面积的RSD分别为0.98%、0.90%、1.00%。2.5 加样回收率实验

-1

2.3 专属性实验

取已测定含量的复方银杏注射剂水解样品6份分别加入对照品溶液适量,相同色谱条件测定,计算银杏总黄酮醇苷平均回收率为101.23%,RSD为1.43%。2.6 正交实验及方差分析2.6.1 因素水平的确定

根据文献[4,5],对银杏黄酮的水解时间从30min到3h,水解温度从75℃到95℃进行预试,结果显示,温度过低回流过于温和,而长时间高温水解会造成该复方中的其他组分少量

取不含银杏叶提取物的阴性对照注射液,按供试品溶液的制备方法,制备阴性对照溶液,相同色谱条件进样测定,检测结果证实:阴性对照溶液在相应保留时间无干扰。

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