平板分离法以及高压蒸汽灭菌法实验

生物化学实验

平板分离法

一、目的要求

掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。

二、基本原理

在海水、水、空气或人及动、植物体中,不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起,当我们希望获得某一种微生物时,就必须从混杂的微生物类群中分离它,以得到只含有这一种微生物的纯培养,这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

为了获得某种微生物的纯培养,一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同,而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长,而抑制其他菌生长的环境,从而淘汰其他一些不需要的微生物,再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物,直至得到纯菌株。

海水是微生物生活的大本营,在这里生活的微生物无论是数量和种类都是极其多样的,因此,海水是我们开发利用微生物资源的重要基地,可以从其中分离、纯化到许多有用的菌株。

三、器材

高氏1号琼脂培养基,肉膏蛋白胨琼脂培养基,马丁氏琼脂培养基,盛9ml无菌水的试管,盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶,无菌玻璃涂棒,无菌吸管,接种环,10%酚,无菌培养皿,链霉素,土样等。

四、操作步骤

平板划线分离法

(1)按稀释涂布平板法倒平板,并用记号笔标明培养基名称。

(2)划线在近火焰处,左手拿皿底,右手拿接种环,挑取上述10-1的海水悬液

一环在平板上划线(图Ⅶ-4)。划线的方法很多,但无论哪种方法划线,其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释,使形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种:

(a)用接种环以无菌操作挑取海水悬液一环,先在平板培养基的一边作第一次平行划线3—4条,再转动培养皿约70°角,并将接种环上剩余物烧掉,待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线,再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后,盖上皿盖,倒置于温室培养。

(b)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线(图Ⅶ-5,B)。划线完毕后,盖上皿盖,倒置温室培养。

(3)挑菌 同稀释涂布平板法,一直到菌分纯为止。

培养基的配置和灭菌

实验目的:

培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质,用以培养或分离各种微生物。因此,营养基质应当有微生物所能利用的营养成分(包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素)和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。

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