cDNA_AFLP比较当归早薹基因转录差异反应体系的建立

生物技术通报

研究报告

BIOTECHNOLOGY BULLETIN2010年第9期

cDNA AFLP比较当归早薹基因转录

差异反应体系的建立

于光 段金廒 宋秉生

1

1

2

何子清

2

(1南京中医药大学,南京210046;2甘肃岷归中药材科技有限公司,兰州730010)

摘 要: 建立了利用cDNA AFLP技术对当归早薹相关的差异表达基因进行筛选的方法,优化了影响cDNA AFLP试验结果的关键因子,包括选择性扩增模板量、酶离子浓度、dNTP浓度。结果表明,以1 L稀释10倍的预扩增产物作为模板、1 5mmol/LMgCl0 6mmol/LdNTP,进行的选择性扩增反应获得DNA片段分子量范围较广,在100-1000bp长度范围中2、均有扩增片段,是较为理想的选择性扩增的结果。聚丙烯酰胺凝胶电泳验证了试验结果,在优化条件下利用部分引物组合可以较好地比较早薹当归在基因转录水平发生的差异。

关键词: 当归

早薹

cDNA AFLP

反应体系

表达差异

OptimizationofcDNA AFLPReactionSystemforEarlyBolting

Angelicasinensis(Oliv.)Diels

YuGuang

1

2

1

DuanJin ao

1

SongBingsheng

2

HeZiqing

2

(NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210046;

GansuMinguiChineseMedicinalMaterialsTechnologyCo ,Ltd.,Lanzhou730010)

Abstrac:t Inthisstudy,thereactionsystemofcDNA AFLPforAngelicasinensiswasestablished,template,dNTP,Mg2+ofselective

amplificationwasoptimized.Thestablereactionsystemwasestablished:20 Lselectiveamplificationreactionsystemcontaining1 Ldi lutedpreamplificationproducts,1 5mmol/LMgCl 6mmol/LdNTP.Inthisreactionsystem,amplificationproductsinthelengthrange2,0about100-1000bp.cDNA AFLPproductswereresolvedina6%denaturingpolyacrylamidesequencinggelrunwith1 TBEelectro phoresisbuffer.

.)DielsEarlyboltingKeywords: Angelicasinensis(Oliv

cDNA AFLP

ReactionSystem

Geneexpressiondifferences

[1-3]

当归为伞形科(Umbeliferae)当归属(Angelica)

植物Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根,为大宗中药材品种。始载于东汉#神农本草经 ,列为中品,具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠之功效,为临床妇科最常用中药之一,自古就有!十方九归 之誉,又因药食两用国内外需求量巨大。然而,当归在主产地甘肃岷县等地种植过程中提前抽薹(早薹)率高达20%-60%,严重影响着当归的产量和品质,制约着当归产业的健康发展。主产地甘肃省农业相关部门对岷归早薹的成因,多从生态因子及营

养状况进行了一些相关研究,但未有深入和突破,尚未取得有效防治措施。随着当归需求量的巨增,解决当归早薹问题对当归的产业化发展显得尤为迫切。

从拟南芥、水稻等模式植物的研究进展发现,高等植物的开花诱导过程受自身遗传因子和外界环境因素两方面决定,是开花基因在时间和空间上顺序表达的结果。cDNA AFLP是从AFLP(amplifiedfragmentlengthpolymorphism)衍生而来的RNA指纹识别技术,现已发展成为较为成熟的转录组研究技

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收稿日期:2010 06 13

基金项目:国家!十一五 科技支撑计划资助项目(2006BA109B05 01,2007BA137B02),国家自然科学基金资助项目(30801518)作者简介:于光,男,讲师,博士研究生,研究方向:中药资源与分子生物学;E mai:lyuguang@http://www.wendangwang.com通讯作者:段金廒,男,教授,博士,:;E http://www.wendangwang.com

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