功能蛋白研究作用(1)

功能蛋白研究方法

功能蛋白研究课程考核

1.细胞内蛋白质定位研究的常见方法有哪些,请选择一种较常用的定位研究方法,举例说明细胞内蛋白质的定位研究能解决什么生物学问题,附至少一篇英文参考文献。

在自然界中,有真核生物、原核生物还有病毒。除病毒外,不论原核生物还是真核生物,他们的细胞都是高度有序的结构,新产生的蛋白质都要被准确的运送到细胞的各个部分,如线粒体、溶酶体、叶绿体、细胞核和细胞质等,以更新其结构组成和维持其功能。每种细胞器都有一组特定的蛋白。除叶绿体,线粒体能少量合成蛋白外,绝大部分蛋白是在胞浆或糙面内质网合成,最终运至不同地点,形成成熟的蛋白质并行使功能。

我们在日常的研究中比较常见的细胞内蛋白质定位的方法主要有以下几种:

1.差速离心法;2密度梯度离心法;3.免疫荧光;4.免疫胶体金标记;5.与绿色荧光蛋(GFP)构建融合基因表达融合蛋白;6.生物信息学方法预测蛋白定位。

差速离心是利用不同的离心速度将大小不同的细胞器分离开,然后结合免疫印迹对蛋白进行亚细胞定位。

密度梯度离心则是利用细胞中不同细胞器有着不同的沉降系数,使沉降系数不同的细胞器分离开,再结合免疫印迹对蛋白质进行细胞定位。

免疫荧光是根据抗原抗体反应原理,先将待测蛋白与相应抗体(一抗)反应,然后用带有荧光标记物的抗体(二抗)与一抗反应并结合,再结合荧光显微镜或是激光共聚焦显微镜对蛋白进行定位。

免疫胶体金标记其实也是抗原抗体反应,首先将待测蛋白对应的抗体连接到胶体金上,然后载有相应抗体的胶体金会定向的与待测蛋白进行抗原抗体反应结合到胶体金上。由于金颗粒具有高电子密度的特性,当胶体金聚集到达一定密度时可出现肉眼可见的粉红色斑点,结合显微镜便可对蛋白进行定位。

生物信息学方法预测细胞内蛋白定位的原理是根据蛋白质氨基酸序列特征以及亚细胞结构特征,提取特征参数或描述符,通过算法比较查询序列中所包含的特征参数与各类被定位蛋白质的相似度,从而对蛋白质的亚细胞定位作出判断。

下面我详细介绍一下与GFP构建融合基因表达融合蛋白进行细胞内蛋白的定位。GFP是许多腔肠动物所特有的生物荧光素蛋白。GFP是一种接收及最终放

功能蛋白研究作用(1)的相关文档搜索

功能蛋白研究作用(1)相关文档

最新文档

返回顶部