_葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究

有关酚类和原花青素

安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2008,36(1):30-32                     责任编辑 刘月娟 责任校对 马君叶

β2葡萄糖苷酶水解银杏黄酮糖苷的研究

伍毅1,王洪新1,23

 

(1.食品科学与技术国家重点实验室,江南大学食品学院,江苏无锡214012;2.石河子大学食品学院,新疆石河子832003)

摘要 采用β2葡萄糖苷酶水解银杏叶提取物(GBE),使糖苷型黄酮转化为苷元型黄酮。通过正交试验得出水解的最佳工艺参数,即温度

-3

40℃,酶浓度5×10mg/ml,pH值5.0下水解6h。由HPLC图谱可得该条件下水解的苷元得率9.08%,纯度68.24%。酶解产物中还部分保留了银杏内酯等活性成分,有利于保留银杏叶提取物的综合生物活性。

β关键词 银杏叶提取物;黄酮苷元;2葡萄糖苷酶;水解

中图分类号 Q946  文献标识码 A  文章编号 0517-6611(2008)01-00030-03StudyonHydrolyzingGinkgoFlavoneGlycosidewithβ2glycosidase

eyLaboratoryofFoodScienceandTechnology,SchoolofFoodScience&Technology,SouthernYangtzeUniversity,Wuxi,JiangsuWUYietal (StateK

)214012

βAbstract 2glycosidasewasusedtohydrolyzetheextractfromginkgoleavestotransformflavoneglycosideintoflavoneaglycone.Theoptimumtechno2

-3

logicalparametersofhydrolysiswereobtainedthroughorthogonalexperiment,whichwereenzymeconcentrationof5×10mg/mlandpHvalueof5.0,hydrolysistemperatureof40℃andtimeof6h.ItwasknownfromHPLCspectrogramthattheaglyconeyieldofunderthisconditionwas9.08%withpurityof68.24%.Intheenzymolysisproducts,theactiveingredientssuchasginkgolactonewerealso,whichwasinfavorofreservingthesynthesizedbioactivityofginkgoleavesextract.Keywords Ginkgoleavesextract;Flavoneaglycone;β2glycosidase;Hydrolysis

  银杏(GinkgobilobaL.)属银杏科银杏属多年生落叶乔木,是冰川时期存活的孑遗植物之一,属我国特产植物,南、湖北等地,其种子、根、叶均可药用。黄酮类物质,,,用,,银杏黄酮被水解成,黄酮苷元的效价是黄酮糖苷效价的7倍

[1-2]

[5]:

(1)[(A1+A2+A3)×K+B]×100%

W

式中,A1为槲皮素峰面积(mAu);A2为异鼠李素峰面积

(mAu);A3为山奈酚峰面积(mAu);K为槲皮素标准曲线斜率(mg/ml);B为槲皮素标准曲线截距;V为样品溶液体积(ml);W为样品重量(mg)。

1.3.3 槲皮素标准曲线的制作[6]。准确称取对照品槲皮素0.02g,置于100ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得槲皮素

。因此,改善黄酮的

构型是提高银杏黄酮在人体内吸收率的重要途径。笔者采用生物酶法水解银杏黄酮,生成了具有更高生物活性的苷元型黄酮,而且具有环保、反应条件温和等优点。

1 材料与方法

1.1 材料 银杏叶提取物(GBE),黄酮含量≥24%,由上海

标准储备液(0.20mg/ml)。用移液管分别取槲皮素标准储备液2.5、5、10、20、40ml,用无水甲醇定容至50ml容量瓶,得

0.01、0.02、0.04、0.08、0.16mg/ml的标准溶液。分别取标准

溶液和储备液进样10μl,测定峰面积。根据标准品的浓度和峰面积可得回归方程:

y=7×10

-5

β宝丰生物有限公司提供。2葡萄糖苷酶由西格玛奥德里奇

(上海)贸易有限公司提供。槲皮素标准品,纯度≥99.0%,

x-0.0058(2)

由上海康九化工有限公司提供。

1.2 GBE的酶解工艺[3] 称取5mgβ2葡萄糖苷酶,用柠檬

r=0.99(n=5),线性范围为0.01~0.10mg/ml。

1.4 单因素试验 影响酶解工艺效果的因素主要有时间、

酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(pH值5.0)定容至100ml。然后,称取一定量的银杏叶提取物,适量甲醇溶解,加入缓冲溶液和酶,置于水浴锅中恒温水解,将水解液高速离心、过滤后,沉淀用无水甲醇溶解,再上旋转蒸发器以除去多余的溶剂,

恒重后用10ml无水甲醇充分溶解得样液,0.45μm滤膜过滤后待测定。

1.3 总黄酮苷元的测定方法

1.3.1 分析条件。色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(15mm×6.0mm,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇∶水(0.5%磷酸)梯度洗脱;流速:1ml/min;检测波长:368nm;进样量:10μl。1.3.2 计算方法。由文献可知,对照品溶液、换算因子的选

[4]

温度、酶浓度及pH值等[7]。该试验分别研究了不同因素对

GBE酶解效率的影响。

1.5 最佳工艺参数的确定 在单因素试验的基础上,为了

进一步确定反应的最优条件以及影响因素的主次,采用正交试验设计方法进行优化[8]。表1为酶解试验正交试验因素水平表。

表1 酶解正交试验因素与水平

Table1 Factorsandlevelsoforthogonaltestforenzymolysis

水平

Level1

2A(温度)Temperature

B(时间)Time∥h5

6C(pH值)pHvalue

45D(酶浓度)Enzymeconcentration

mg/ml0.0250.005℃

3040用不同对测定结果的影响较小。同时,受对照品来源的限制,3种苷元的定量分析都可以用槲皮素标准物的标准工作

2 结果与分析

作者简介 伍毅(1983-),女,四川通江人,硕士研究生,研究方向:食品

功能性成分。3通讯作者。

收稿日期 2007208221

2.1 酶解单因素试验结果

2.1.1 酶解时间的选择。图1是固定酶解温度40℃,pH值

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