向师哥师姐寻复习资料,就到我的煤医网:www.wendangwang.com一,蛋白质的沉淀凝固反应在水溶液中,蛋白质分子的表面由于形成水化层和双电层而使蛋白质成为稳定的胶体颗粒.在一定的物理化学因素影响下,蛋白质颗粒失去电荷,脱水,甚至变性,可以使蛋白质以固态形式从溶液中析出的过程.这种反应可分为以下两种: 1.可逆性沉淀反应:蛋白质虽已沉淀析出,但是它的分子内部结构并未发生显著变化,蛋白质仍然保持原有的性质,沉淀因素除去后,蛋白质能够再溶于原来的溶剂中.这种作用称为可逆性沉淀反应.例如,盐析作用,以及在低温下乙醇对蛋白质的短时间作用,利用等电点的沉淀等. 2.不可逆沉淀反应:在发生沉淀反应的同时,蛋白质分子内部结构和空间构型遭到破坏,使蛋白质失去原来的天然性质,这时候的蛋白质发生了变性.变性的蛋白质在沉淀因素去除后不能再溶解于原来溶剂中,因此称为不可逆沉淀反应.重金属盐,植物碱试剂,过酸,过碱,加热,震荡,超声波,有机溶剂等.沉淀蛋白质的常用方法: (1)蛋白质的盐析:①将(NH4)2SO4,Na2SO4,NaCl等加入蛋白质溶液,蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,稳定性遭受破坏而沉淀析出.析出的蛋白质仍保持其天然蛋白的性质.减低盐的浓度时,蛋白质还能再溶解.②沉淀不同的蛋白质所需中性盐的浓度不同,而使用的盐类不同时反应也有差异.向含有清蛋白和球蛋白的鸡蛋清溶液中加硫酸镁或氯化钠至饱和,则球蛋白沉淀析出.加硫酸铵至饱和,则清蛋白沉析出.在等电点时,清蛋白可被饱和硫酸镁或氯化钠或半饱和硫酸铵溶液沉淀析出,该法称为蛋白质的分级盐析. (2)乙醇沉淀蛋白质:乙醇能够破坏蛋白质胶体性质而使蛋白质沉淀.在室温中蛋白质与乙醇接触较久后,变性形成不可逆沉淀.低温下,可以避免乙醇的变性作用. (3)重金属沉淀蛋白质:结合成稳定沉淀析出.蛋白质在水溶液中是两性电解质,在碱性溶液中(对蛋白质的等电点而言,pH>pI),蛋白质分子带负电荷,能与带正电荷的金属离子结合成蛋白质盐.等电点:当蛋白质溶液处于某一 pH时,蛋白质解离成正,负离子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的 pH称为蛋白质的等电点.二,氨基酸的纸层析★层析:利用混合物在两种或两种以上的不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法.用滤纸为支持物进行层析的方法,称为纸层析法,它是分配层析法的一种.滤纸可吸附有机溶剂中的水作为固定相,有机溶剂作为流动相.将样品点在滤纸上进行展层,由于它们各自的分配系数不同,故在流动相中移动速率不等,从而在两相之间发生分配现象.在固定相中分配趋势越大,随

流动相移动速度越慢.氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点,氨基酸在滤纸上的移动速率用 Rf表示.展层斑点中心与原点间的距离 Rf=——————————————溶剂前缘与原点之间的距离氨基酸无色,利用茚三酮反应,可将氨基酸层析点显色作定性,定量用.三,血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳★电泳:溶液中带电颗粒在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.血清中含有清蛋白,α-球蛋白,β-球蛋白,γ-球蛋白和各种脂蛋白等,pI均小于 8.6.各种不同的蛋白质由于氨基酸组分,立体构象,分子量,等电点及形状的不同,在电场中迁移时泳动的速度有所不同.分子量小,等电点低,在相同碱性 pH缓冲体系中,带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度较快.用醋酸纤维素薄膜为支持物,在薄膜毛面点样,电泳时点样面朝下,点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸上.正常人血清在 pH 8.6的缓冲体系中电泳 1 h左右,可以使血清蛋白得到分离,经氨基黑 10B染色液染色后血清蛋白质可显示出 5条不连续的区带.以清蛋白泳动最快,其余依次为及α1-,α2-,β-,及γ-球蛋白,在电泳图谱上由正极端排列至负极.

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原版资料提供刘晓楠