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实验六 牛乳中蛋白质含量的测定

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实验九 牛乳中蛋白质含量的测定—紫外吸收光谱分析法

一、实验目的

1.学习运用紫外吸收光谱分析方法测定牛乳中蛋白质的含量；

2.了解紫外吸收光谱分析仪器结构及使用方法；

3.了解牛乳中蛋白质含量。

二、实验原理

蛋白质及其降解产物(月示 、胨、肽和氨基酸)的芳香环残基(酪氨酸和色氨酸)在紫外光区对 =280nm波长的紫外光具有选择性吸收作用。在此波长下，牛乳样液对紫外光的吸收程度与其蛋白质浓度(3~8 mg/ml)成线性关系，因此，通过测定牛乳蛋白质溶液吸光度A，查阅事先用凯氏定氮法测定蛋白质含量的标准牛乳样品所作的标准曲线，即可求出待测样品中蛋白质含量。

三、主要试剂和仪器

1.试剂—97%冰醋酸

标准牛乳样品(已采用K氏定氮法测定出蛋白质含量)

2.仪器—紫外吸收光谱分析仪器(UV2550型，附石英比色皿，日本岛津) 25ml具塞比色管

四、测定方法—

1.标准曲线制备

分别吸取已经K氏定氮法测定出蛋白质含量的标准牛乳样液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml于六个25ml具塞比色管(含蛋白质3~10mg) 各用97%冰醋酸溶液定容至刻度 摇匀 入1cm石英比色皿 于 280nm下测吸光度A(97%冰醋酸溶液参比) 绘制A~c标准曲线。

2.样品测定

准确取待测牛乳样液0.3ml 入25ml具塞比色管中 用97%冰醋酸溶液定容至刻度 同上测定样液吸光度A 在A~c标准曲线上查出蛋白质浓度c 求出蛋白质含量(%)

五、计算

V—待测牛乳样液体积，ml 蛋白质 ml牛乳 c 100V 1000式中 c —从标准曲线上查得的蛋白质mg数

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