新城疫抗体检测

一.试验材料:

注射器、抗凝剂、离心机、吸管、微量滴管、平皿、血液、抗原、有机玻璃血凝板25孔、生理盐水、废弃瓶。

二.试验步骤:

㈠红细胞悬浮液的制备:

①采血,用有抗凝剂的注射器采血5-10毫升。

②离心,将血液吸入离心管中,经3000转离心5-10分钟,吸取上清夜和红细胞上层的白细胞薄膜,将沉淀的红细胞加稀释液洗涤,再加3000转离心5-10分钟,反复三次,将最后一次离心后的细胞泥按5%稀释。

㈡抗原的效价

①用微量滴管吸取2.5毫升生理盐水滴入玻璃血凝板。

②放入抗原 2滴,每孔反复十余次。

③放入红细胞离心过的7%的比例反复十余次。

④沉淀。

⑤恒温37度,20-25分钟。

㈢红细胞凝集效价:能使鸡红细胞完全凝集的病毒液的最高稀释倍数。

① 滴管向玻璃血凝板每孔加生理盐水一滴(0.025)

② 用病毒抗原液0.025毫升加入第一孔内,旋转稀释,反复操作十余次以上,然后移入第二排,第三排。(稀释倍数依次为1:2—1:2048,最后孔为红细胞对照),最后一次丢弃。

③ 再以微量滴管加0。5%红细胞悬浮液一滴(同上面抗原反过来操作)。

④ 振荡,再置37 恒温箱20-30分钟。

㈣最后的洗涤工作(微量反应板的特点)

①反应板先用自来水反复冲净污物后。

②干燥后,放2-3%浓度的盐酸中浸泡24小时。

③捞出后用自来水冲洗多次,干燥。

④放1%氢氧化钠过夜。

⑤取出,洁净水冲洗37干燥。

五.结果判定:

凡能使4个凝集单位病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释度(倍数)称为血凝抑制价。

血凝抑制价在1:80以上为阳性,1:40为可疑,1:20为阴性。

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