自己整理的western blot步骤

组织蛋白质抽提

取-80℃冰冻的大鼠大脑皮质、海马组织,1mg组织加10ulRIPA,并加入蛋白酶抑制剂cocktail,加入PMSF,用电动匀浆器低速匀浆30秒,至组织完全裂解。冰上孵育30min。之后离心(4℃,12,000xg离心20分钟),吸取上清,移至新的冻存管中置于-80℃冰箱保存待用。

样品变性:取预冷的25ul 5×SDS加样缓冲液加入100ul样品中,混匀,煮沸10min。

SDS-PAGE电泳(根据分子量选择不同的胶浓度) 分离胶

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浓缩胶

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