·40·中国药物与临床2012年1月第12卷第1期ChineseRemedies&Clinics，January2012,Vol.12,No.1宫内膜的影响，寻求改善PCOS子宫内膜的途径，以进一步提高多囊卵巢综合征妊娠的成功率。ImagingSystem系统进行图象灰度值分析。1．7统计学处理：采用SPSS17．0统计软件进行统

计学分析，实验数据均以±s表示，样本间采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

果2结

2．1动情周期监测结果：阴道涂片并行巴氏染色后，光镜下观察，模型组大鼠在应用来曲唑12d后动情周期失去规律性变化，均处于动情间期时相（镜下所见几乎均为白细胞，未见角化细胞和上皮细胞），提示无排卵。对照组存在规律的动情周期。1材料和方法1．1实验动物：6周龄清洁级正常健康雌性Wistar大鼠55只，有4~5d的规律动情周期。由山西医科大学动物中心提供。1．2主要试剂：二甲双胍（贵州圣济堂制药有限公司生产，批号20080509，规格0．25g）；来曲唑（江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号09061556，规格2．5mg）；IGF-1、IR试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，免疫组织化学染色试剂盒为北京中杉

金桥生物技术有限公司产品。2．2子宫内膜形态学观察结果：大体观察各组无明

1．3PCOS模型建立与分组：55只大鼠适应性喂养3d后，随机分为对照组15只和模型组40只。模型组给予来曲唑1mg··kg-1d-1，溶于1％羧甲基纤维素（CMC）中，连续灌服21d，对照组正常饲养。每日行阴道涂片（巴氏染色）监测动情周期。造模完成后模型组随机抽取10只，通过血清生殖激素水平和卵巢组织学多囊变来评价造模效果，成功率＞80％时，将模型组剩余30只大鼠随机分成二甲双胍治疗组和PCOS病变组各15只。治疗组每日给予二甲双胍270mg··kg-1d-1（按人与大鼠千克体质量折算系数计算给药剂量），用生理盐水溶解灌胃，PCOS组给予等量生理盐水灌胃每天1次，连续14d，对照组正常喂养。显的区别。光镜下各组腺体形态明显不同。对照组大鼠子宫内膜腺体为多个腺体簇状排列，腺腔大而多褶，腺上皮中可见分泌泡。PCOS组子宫内膜腺体数目减少，为单个腺体分散排列，腺腔小而直。治疗组子宫内膜腺体数目增多，出现簇状排列，但腺腔多小儿直，部分可见到一些皱褶和分支。2．3子宫内膜IGF-1、IR的免疫组织化学染色结果：IGF-1在PCOS子宫内膜腺上皮的表达水平明显高于对照组水平（P＜0．05），治疗组的IGF-1表达较PCOS组显著降低（P＜0．05），但仍高于对照组（P＜0．05），见表1，图1。间质IGF-1表达于与腺上皮相似。表1

组别

对照组各组子宫内膜IGF-1和IR表达水平灰度值比较（±s）只数1．4标本采集：二甲双胍干预14d后用10％水合IGF-1腺上皮间质腺上皮IR间质氯醛3．5μl/g麻醉大鼠，打开腹腔，经腹主动脉穿刺抽血约5ml，3000r/min离心20min，收集血清，-4015

15

15163±6115±10a138±7b161±7111±9a138±5b120±5146±5a130±6b118．3±5．8145．9±5．2a125．2±1．6b℃冻存备用。取Y形子宫观察子宫大体形态，去除周围组织，迅速置入10％中性甲醛中固定。PCOS组治疗组

1．5子宫组织形态学观察：以子宫立位横切面作为注：a与对照组相比P＜0．05；b与PCOS组相比P＜0．05待检平面行石蜡包埋，每个石蜡块分别以4μm厚度连续切片2次（间隔40μm），行苏木素-伊红（HE）染色后光镜观察。IR在PCOS子宫内膜腺上皮的表达水平明显低于对照组水平（P＜0．05），治疗组胰岛素受体的表达水平与PCOS组相比增高（P＜0．05），但仍低于对

照组（P＞0．05），见图2。间质IR表达与腺上皮相似。1．6免疫组织化学染色检测：取子宫切片常规脱蜡

至水，3％双氧水孵育15min，PBS冲洗，滴加一抗，43讨论℃冰箱过夜。用PBS代替一抗作为阴性对照。PBS冲洗，滴加试剂A封闭用正常山羊血清工作液37℃孵育15min，勿洗，滴加试剂B生物素标记的羊抗兔近年来研究［3］发现子宫内膜不仅是卵巢激素作用的靶器官，也具有表达许多因子和受体以调节自身的功能，如HOXA10，葡萄糖转移因子（GLUT4），

局部IR蛋白，IGF-1，雌激素受体（ER），孕激素受体（PR），整合素（avB3）等，直接或间接影响子宫内膜的增值与分化使子宫内膜容受性改变，从而干扰正常受孕，影响妊娠结局。IGg37℃孵育15min，PBS冲洗，滴加试剂C辣根酶标记链酶卵白素工作液37℃孵育15min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，封片，光镜下观察，以细

胞膜和细胞质棕黄色或黄色颗粒为阳性。每张切片随机观察5个高倍镜视野，采用RiosensDigital3．1IR与PCOS子宫内膜：子宫内膜细胞存在多种