中华老年心脑血管病杂志 2 01 4年 1月第 1 6卷第 1期

C h i n J O e r i a t r He a r t B r a i nVe s s e l D i s, J a n 2 0l 4, V o l1 6, N o . 1

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基础研究 .

To l l样受体 4和核因子一 K B信号通路在溶血磷脂酸致动脉粥样硬化中的作用 杨波，林睇J,宗文霞，周志斌

摘要：目的 探讨 T o l l样受体 4 ( TI R 4 )/ NF一 B信号通路在溶血磷脂酸 ( L P A)致动脉粥样硬化中的作用。方法 以不同浓度 LPA( 0~1 0￣ mo l/ I )刺激人单核细胞株 THP 1细胞 4 h,以及 I P A 1/ l mo l/ I处理 THP一 1细胞不同时

间( 0~8 h ),荧光定量 R T— P C R法测定 T I R 4 mR NA表达， We s t e r n b l o t检测 T I R 4蛋白、细胞核 NF _ K B p 6 5表达变化， E I I s A法测定细胞因子 T NF— a,随后在 L P A 1/￣ mo l/ I 条件下， TI R 4单抗干预 THP— l细胞，观察其对 I P A 诱导的细胞核 N F _ K B p 6 5表达及 I、 N F d分泌水平的影响。结果 当L P A 1/￣ mo l/ I 时， TI R 4 mRNA和蛋白及细 胞核 NF _ K B p 6 5表达较 0 mo l/ I…0 1 mo l/ I…0 5 mo l/ I 、 5/ l mo l/ L、 1 0> mo l/ L L P A明显增高，差异有统计学意 义( P<0 . 0 1 )。L P A 1 u mo l/ I 处理 THP 1细胞 4 h时， THP一 1细胞 TI R 4 mR NA和蛋白及细胞核 NF _ K B p 6 5表达水平明显高于 0、 1、 2、 8 h ( P<0 . 0 1 )。与 T L R 4单抗干预前比较， T I R 4干预后 L P A诱导的 T HP 1细胞 N F K B

p 6 5表达及 TN卜Ⅱ分泌水平明显升高，差异有统计学意义 ( P<0 . 0 1 )。结论

L P A可显著上调 THP一 1细胞 TL R 4

表达及促进 N F— K B的活化， I P A致动脉粥样硬化作用可能部分是由

TI R 4/NF— K B信号途径介导的。 关键词： T o l l样受体 4; NF B;溶血磷脂素类；动脉粥样硬化；肿瘤坏死因子 a

Ro l e o f TLR4 a n d NF— K B s i ng a l i n g pa t hwa y i n l y s 0 p h0 s ph a t i d i c a c i d— i n d u c e d a t h e r 0 s c l e r O s i s YANG Bo, I I N Li, ZONG W e n x i a, e t a l ( De p a r t me n t o J C a r d i o l o g y, Hu b e i Pr o v i n c i a l Zh o n g s h a n Ho s p i t a l, Wu h a n 4 3 0 0 3 0, Hu b e i Pr o v i n c e, C h i n a)

Ab s t r a c t: Ob j e c t i v e To s t u d y t h e r o l e o f TLR4 a n d NF— K B s i n g a l i n g p a t h wa y i n l y s o p h o s p h a t i d i c a c i d( I PA )i nd uc e d a t he r o s c 1 e r o s i s . Me t h o d s H uma n THP一 1 c e l l s we r e s t i mu l a t e d wi t h LPA a t

t h e c o n c e n t r a t i o n o f 0—1 0 u mo l/ L f o r 4 h a n d t r e a t e d wi t h LP A a t t h e c o n c e n t r a t i o n o f 1 u mo l/ L f o r 0— 8 h. Ex pr e s s i o n s of TLR4 mRNA, TLR4 pr o t e i n a nd n uc l e o pr o t e i n N F— J c B p6 5 we r e d e— t e c t e d b y f l u o r e s c e n t qu a n t i t a t i v e RT— PCR a nd W e s t e r n bl o t, r e s pe c t i v e l y .TNF— a s e c r e t i on wa s

wa s a s s a y e d b y E L I S A . THP一 1 c e l l s we r e i n t e r v

e n e d wi t h TL R 4 mAb a n d 1 g mo l/ L L P A, r e s p e c— t i v e l y, t o o bs e r v e t he i r e f f e c t on e x pr e s s i on s o f LPA i ndu c e d NF— J c B p6 5 a nd TNF— a s e c r e t i on . Re - s u i t s Th e e xp r e s s i o n l e v e l s o f TLR4 mRNA p r o t e i n a nd NF— J c B p6 5 i n THP一 1 c e l l s we r e s i g ni f i—

c a n t l y h i g h e r a t t h e LP A c o n c e n t r a t i o n o f 1/￣ mo l/ I t h a n a t t h e LP A c o n c e n t r a t i o n s o f 0/￣ mo l/ L,

O . 1￣ r i f o l/ L, 0 . 5 u mo l/ I , 5 t￣ mo l/ L, 1 0/￣ mo l/ I ( P<0 . 0 1 )a n d a t 4 h a f t e r t h e THP一 1 c e l l s we r e t r e a t e d wi t h 1/, mo l/ L L PA t h a n a t 0。 1。 2 a n d 8 h a f t e r t h e y we r e t r e a t e d wi t h 1# mo l/ L LP A ( P% 0 . 0 1 ) .Th e NF K B p 6 5 e x p r e s s i o n l e v e l a n d t h e TN F— a s e c r e t i o n l e v e l we r e s i g n i f i c a n t l y hi g he r i n LPA— i ndu c e d T HP一 1 c e l l s t h a n i n c on t r ol s( P< O. O 1) . Co n c l u s i o n LPA c a n s i gn i f i c a n t— l y up— r e g ul a t e t he e x pr e s s i o n o f TLR4 a nd p r omo t e t he a c t i va t i o n o f NF— J c B i n THP一 1 c e l l s du e

t o i t s a t h r os l e r o s i s pr e v e n t i n g e f f e c t me di a t e d i n p a r t by t he TI R4 a nd NF— J c B s i g na l pa t hwa y .

Ke y wo r d s: To l l— l i k e r e c e p t o r 4; NF— k a p p a B; l y s o p h o s p h o l i p i d s; a t h e r o s c l e r o s i s; t u mo r n e c r o s i s f a c t o r— a l p ha

D OI: 1 0 . 3 9 6 9/ j . i s s n . 1 0 0 9 0 1 2 6 . 2 0 1 4 . 0 1 . 0 1 9

基金项目：湖北省教育厅科学技术研究计划优秀中青年人才项目( Q2 O 1 2 1 1 1 7 ) 作者单位： 4 3 0 0 3 0武汉，湖北省中山医院心内科 (杨波，林刑，宗文霞);武汉科技大学附属天佑医院神经内科 (周志斌) 通信作者：周志斌， E ma i l: z h o u z h i b i n 7 4@1 6 3 . c o i n