牙髓培养细胞体外诱导矿化能力：冠髓与根髓的比较(一)

牙髓培养细胞体外诱导矿化能力：冠髓与根髓的比较(一)

【摘要】目的比较人牙髓的根、冠髓培养细胞体外诱导矿化能力，探讨牙髓干细胞在牙髓中的定位。方法用组织块法对人牙的根髓和冠髓细胞进行原代和传代培养，将第五代培养细胞用条件培养液（20％DMEM＋10nmol/L地塞米松＋10mmol/Lβ-甘油酸钠＋50mg/LL-抗坏血酸）诱导矿化，在诱导后第10、20、30天对细胞进行VonKossa钙染色。结果根髓中形成的矿化小结比冠髓中更早、更强烈。结论根髓比冠髓更容易诱导矿化。牙髓干细胞可能存在于根髓和冠髓之中，在根髓中比冠髓中具有更高的密度。【关键词】牙髓干细胞；细胞培养；矿化结节

Theinducedmineralizationabilityincultureddentalpulpcells:thecomparationbetweencoronalandro otpulpcells

【Abstract】ObjectiveTocomparethemineralizationabilitybetweencultureddentalrootandcoronalpulpcells,andt oinvestigatethelocalizationofdentalpulpstemcells(DPSCs)indentalpulps.MethodsThehumandental rootandcoronalpulpcellswereculturedintissue-explantmethod,the5thgenerationofcellsweresubcul turedwithconditioningmedium(20%DMEM+10nmol/L+dexamethasone+50mg/Lascorbicacid)toin ducemineralization.Atthedaysof10,20,30afterinducing,vonKossaforcalciumstainingwasusedtoinve stigatethemineralizationabilityinrootandcoronalpulpcells.ResultsThemineralizationnodulesappear edearlierandstrongerintherootpulpcellsthanthatinthecoronalpulpcellsobservedinphase-contrastm icroscopeandvonKossastaining.ConclusionRootdentalpulpcellscouldbeinducedtomineralizationmo reeasilythanthecoronalpulpcells.DPSCsmayexistinbothrootandcoronalpulp,anditsdensityintheroot pulpishigherthanthatincoronalpulp.

【Keywords】dentalpulpstemcells；cellculture；mineralizationnodules

牙髓干细胞（dentalpulpstemcells，DPSCs）在成体牙髓腔中的定位问题是牙体组织工程学中尚未解决的基本问题。研究表明，体外培养的DPSCs和骨髓干细胞一样，都具有在一定条件下诱导矿化形成矿化小结的能力，矿化小结的形成是DPSCs分化的标记。本文通过对体外培养的人牙髓髓细胞诱导矿化，并对其矿化能力进行比较，以探讨DPSCs在牙髓中的定位。

1材料与方法

1.1主要实验器材及试剂CO2培养箱（Nuaire,America）；超净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）；相差显微镜（Olympus,Japan）；细胞培养瓶及培养板（Costar,America）；高速离心机（上海医用设备厂）；细胞记数板；高糖DMEM培养基（Gibco,USA）；胎牛血清（Hyclone公司）；地塞米松（Sigma,USA）；L-抗坏血酸（Amesco,USA）；β-甘油磷酸钠（E.Merck,Darmstadt）。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养收集5颗16～25岁健康人因正畸或阻生而拔出的第三磨牙，在无菌条件下分别取其根髓和冠髓，用组织块法进行细胞原代和传代培养〔1〕，培养液为DMEM。

1.2.2细胞染色分别将生长状态良好的冠髓和根髓细胞接种于有盖玻片的6孔板上，当细胞汇合约60%～70%时，改用条件培养液（加入10nmol/L地塞米松＋10mmol/Lβ-甘油酸钠＋50mg/LL-维生素C），连续培养30天。在倒置相差显微镜下观察矿化结节形成情况。分别于10、20、30天时，取出盖玻片，按VonKossa法进行染色。染色方法如下：（1）取出长有细胞的盖片，PBS冲洗3遍，FAA固定液（80%乙醇9ml，冰醋酸0.5ml，中性福尔马林0.5ml）中固定30min。（2）蒸馏水冲洗3次。（3）固定后的细胞加入5%的硝酸银溶液，良好日光下染色1h，蒸馏水冲洗，5%的硫代硫酸钠作用1～2min，再用蒸馏水洗5min，干后封片，或伊红复染，常规脱水后封片。

结果判断：矿化结节被染成深黑色。