免疫组化步骤
免疫组织化学染色：各例石蜡包埋组织均取切片 6 张，3 张分别做
BRMS1、SATB1 和 RIZ1 蛋白免疫组化染色，1 张进行 HE 染色，1 张备 用，1 张用 PBS 液代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作对照。具 体步骤如下：
组织蜡块经 4μm 厚度连续切片后，置烤箱 60℃干燥，贴附 40 分钟 ↓
二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各 10 分钟
↓
无水乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各 10 分钟，95%、85%、75%酒精各 5 分钟 ↓
自来水冲洗。用 PBS(PH7.4)冲洗 3 分钟×3 次
↓
放入柠檬酸盐缓冲液中加热，保持 92-98 ℃ 15分钟，
↓
室温下自然冷却，PBS(PH7.4)冲洗 3 分钟×3 次
↓
3%过氧化氢溶液室温孵育 10 分钟， PBS(PH7.4)冲洗 3 分钟×3 次。 ↓
除去 PBS，滴加一抗，湿盒内 4℃过夜
↓
PBS(PH7.4)冲洗 5 分钟×3 次
↓
滴加聚合物增强剂(试剂 A)，37℃温箱 20 分钟
↓
PBS(PH7.4)冲洗 3 分钟×3 次
↓
滴加酶标抗鼠/兔聚合物(试剂 B)，37℃温箱 30 分钟
↓
PBS(PH7.4)冲洗 3 分钟×3 次
↓
滴加新鲜配制的 DAB 溶液，显微镜下观察 3 分钟
↓
自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化
↓
梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
染色过程中均设有阳性和阴性对照。以已知阳性组织切片作为阳性对照， 阴性对照以 PBS 替代一抗，余操作步骤同实验片。
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